إنزيمات التقييد هي إنزيمات تقطع الحمض النووي المفرد أو المزدوج. كل انزيم التقييد لديه تسلسل النيوكليوتيدات محددة، ودعا موقع تقييد، أنه يعترف ويقطع. وتستخدم الانزيمات تقييد لتسلسل الحمض النووي، والتحليل الطفرات، والاستنساخ والتضخيم من الحمض النووي. يستخدم العلماء الانزيمات تقييد لإدراج الجينات ذات الاهتمام في ناقلات التعبير، جزيئات الحمض النووي التي يمكن أن تتكرر بشكل منفصل عن الحمض النووي الكروموسومات. ويمكن بعد ذلك إدخال ناقلات تحتوي على الجين من الفائدة في سلالة بكتيرية للتعبير وتوصيف البروتينات.
فيديو اليوم
الخطوة 1
تحديد مواقع انزيم تقييد على متجه الخاص بك من خلال النظر في خريطة تقييد. سوف خريطة تقييد اقول لكم أي الإنزيمات سوف تقطع ناقلات الخاص بك، وأين.
الخطوة 2
اختر إنزيم التقييد الذي يحتوي أيضا على موقع موجود على إدراج الجينات الخاصة بك، من خلال النظر في تسلسل إدراج. تأكد من أن موقع التقييد في وضع يسمح لك بإدراجه خارج الجين المعني، لذلك لا تفقد أي جزء من الجين.
الخطوة 3
تأكد من عدم وجود نسخ مكررة من موقع التقييد في أي مكان في إدخال الجين أو ناقله. وهذا سوف يسبب تخفيضات متعددة في الحمض النووي الخاص بك وتعطيك بيانات مضللة.
الخطوة 4
حاول أن تختار إنزيمات التقييد التي تقطع بنهايات لزجة، بدلا من نهايات حادة. وتحدث نهايات مثبتة عندما يخفض الإنزيم الحمض النووي المزدوج تقطعت بهم السبل بطريقة متداخلة، مما يترك تراكم واحد تقطعت بهم السبل الذي يسهل التعلق مع قطع إدراج بطريقة عكسية. وتنتهي الحادة عندما يتم قطع الحمض النووي المزدوج تقطعت بهم السبل بطريقة سلسة، وهذه هي أكثر صعوبة أن نعلق.
الخطوة 5
اختر انزيم تقييد مختلف لكلا طرفي إدراج الخاص بك لضمان إدراجه في ناقلات في الاتجاه الصحيح وضمان ناقلات لا إعادة إرفاق نفسه.
الخطوة 6
في محاولة لاختيار اثنين من الإنزيمات تقييد التي تعمل بشكل جيد في نفس النظام العازلة ودرجة الحرارة. إذا لم يكن ذلك ممكنا، قم بتشغيل كل عملية هضم بشكل منفصل.
أشياء تحتاج
- تسلسل إدراج الجينات
- خريطة تقييد لناقلات اختيار
- قائمة الانزيمات تقييد ومواقع قطعها
نصائح
- وقد وضعت بعض برامج الويب لتحديد مواقع تقييد على تسلسل الحمض النووي بسرعة. أحد هذه البرامج هو من نيو إنجلاند بيولابس.
